我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購(gòu)買143B 細(xì)胞到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測(cè)，100%進(jìn)口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無**、支原體污染。 細(xì)胞到達(dá)客戶手中，1個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)任何問題，導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次。

產(chǎn)品名稱	143B 細(xì)胞
規(guī)格	詳見說明書
貨號(hào)	BH-8010745

實(shí)驗(yàn)材料： 

1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 

2. 100ml燒杯2個(gè)； 人皮膚成纖維細(xì)胞,CCC-HSF-1細(xì)胞

3、50ml離心筒2個(gè) 

4、培養(yǎng)皿1個(gè)，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個(gè) 

5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個(gè)；無菌玻璃攪拌棒1個(gè) 

6、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊； 

7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把； 

8、酒精燈1臺(tái)； 

培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案：

以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案，必須參閱針對(duì)具體細(xì)胞的產(chǎn)品說明書。 

1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲(chǔ)存，直至使用。請(qǐng)注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。

2.凍存貼壁細(xì)胞時(shí)，利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細(xì)胞所需完全培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。

3.采用血球計(jì)數(shù)器、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀按照臺(tái)盼藍(lán)拒染法或者使用自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測(cè)定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度，計(jì)算凍存培養(yǎng)基需要量。

4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動(dòng)細(xì)胞沉淀。

注：離心速度和時(shí)間取決于細(xì)胞種類。

5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀，將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。

6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時(shí)，應(yīng)不時(shí)輕輕混合細(xì)胞，使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。

7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞，使溫度每分鐘大約降低  1°C。或者，將裝有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。 

培養(yǎng)操作步驟 ：

1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布； 

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）； 

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)； 

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片完全浸在培養(yǎng)液中； 

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。 

實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明 ：

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法； 

2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)玻璃**，并經(jīng)過鉻酸洗液處理； 

3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕； 

4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率； 

5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

phospho-beta 2 Adrenergic Receptor (Ser355 + Ser356) 英文名稱： 磷酸化腎上腺素能受體β2/β2-AR抗體  0.1ml

APOD 英文名稱： 載脂蛋白D抗體  0.2ml

ASIC1/BNaC2/ASIC1A 英文名稱： 酸敏感離子通道1抗體  0.1ml

ADAR1 (C-terminus) 英文名稱： 雙鏈RNA腺苷酸脫氨基酶抗體（C端）  0.2ml

AF10 英文名稱： 髓系、混合系白血病易位基因10抗體  0.1ml

ADCY1 英文名稱： 腺苷酸環(huán)化酶1抗體  0.2ml

APC 英文名稱： 腺瘤樣息肉抗體  0.1ml

AGPAT1 英文名稱： 溶血磷脂?；D(zhuǎn)移酶抗體  0.2ml

ANKS3 英文名稱： 錨蛋白重復(fù)及SAM結(jié)構(gòu)域蛋白3抗體  0.2ml

phospho-ALK (Tyr1586) 英文名稱： 磷酸化間變型瘤激酶抗體  0.1ml

ACADVL 英文名稱： ?；o酶A脫氫酶很長(zhǎng)鏈抗體  0.2ml

AMSH 英文名稱： 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)銜接結(jié)合蛋白抗體  0.2ml

ASB3 英文名稱： 錨蛋白重復(fù)序列-細(xì)胞因子信號(hào)抑制物盒蛋白家族3抗體  0.2ml

Aurora C 英文名稱： 有絲分裂激酶B抗體  0.2ml

Phospho-Ack1 (Tyr284) 英文名稱： 磷酸化Ack1抗體  0.1ml

Phospho-Ack1 (Tyr326) 英文名稱： 磷酸化Ack1抗體  0.1ml

Phospho-beta-Arrestin 1 (Ser412) 英文名稱： 磷酸化β抑制蛋白1抗體  0.1ml

L-天門冬鈉

英文名稱：L-Aspartic acid sodium salt

其他名稱：L-天冬氨酸鈉鹽；L-天門冬氨酸鈉鹽；氨基-L-丁二酸一鈉

CAS號(hào)：3792-50-5

HO2CCH2CH(NH2)CO2Na ? H2O = 173.10

級(jí)別：BR

含量：≥98.0%

比旋光度：+18.5～+21.0o

PH值（10%溶液）：6.0～7.5

氯化物：≤0.10%

干燥失重：≤0.5%

重金屬：≤0.001%

鐵鹽：≤0.002%

砷鹽：≤0.0001%

性狀(以下信息僅供參考)：白色結(jié)晶粉末

用途：本品僅供科研，不得用于其它用途

保存：RT

L-天冬氨酸鎂

英文名稱：L-Aspartic acid Mg salt

其他名稱：L-天門冬氨酸鎂

CAS號(hào)：2068-80-6

C8H12MgN2O8·2H2O=324.53

級(jí)別：BR

含量：≥98.0%

比旋光度：+20.5～+23.0o

PH值（10%溶液）：6.0～8.0

重金屬：≤0.001%

143B 細(xì)胞水分：10～14%

氯化物：≤0.02%

硫酸鹽：≤0.05%

鐵鹽：≤0.003%

銨鹽：≤0.02%

砷鹽：≤0.0001%

性狀(以下信息僅供參考)：白色結(jié)晶或結(jié)晶性粉末，易溶于水

用途：本品僅供科研，

收到如何處理:

1、首先，觀察培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請(qǐng)拍照，并及時(shí)與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。

2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分貼壁細(xì)胞會(huì)有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時(shí)，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。

3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸浮）、細(xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。

4、靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細(xì)胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)。

5、貼壁細(xì)胞：若細(xì)胞生長(zhǎng)密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)基，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。

6、懸浮細(xì)胞：將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時(shí)，若細(xì)胞密度超過80%，可將細(xì)胞懸液分至2個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至5ml；若細(xì)胞密度未超過80%，將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時(shí)再進(jìn)行傳代操作。