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我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等,購買到貨后,由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存,凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測(cè),100%進(jìn)口來源,100%保證5代以內(nèi),活力>95%,無**、支原體污染。 細(xì)胞到達(dá)客戶手中,1個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)任何問題,導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡,我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次。產(chǎn)品僅用于科學(xué)研究
產(chǎn)品名稱 |
5637細(xì)胞 |
規(guī)格 |
T25 |
貨號(hào) |
BH-0109724 |
產(chǎn)品詳細(xì) 膀胱癌細(xì)胞;5637
形態(tài)特性 上皮樣
生長特性 貼壁生長
特征特性 該細(xì)胞源于一位68歲的患有膀胱癌的白人男性患者。據(jù)報(bào)道,該細(xì)胞能產(chǎn)生SCF、IL-1、IL-3、IL-6、G-CSF、GM-CSF等。
培養(yǎng)條件 RPMI1640+10%FBS
傳代方法 1:4~1:8傳代;每周換液2~3次。
實(shí)驗(yàn)材料:
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶;8ml小牛血清(FCS) 1瓶;100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶;PBS(-)1 瓶
2. 100ml燒杯2個(gè); 人皮膚成纖維細(xì)胞,CCC-HSF-1細(xì)胞
3、50ml離心筒2個(gè)
4、培養(yǎng)皿1個(gè),細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個(gè)
5、1ml ,200μl移液器各1支;槍頭盒2個(gè);無菌玻璃攪拌棒1個(gè)
6、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊;
7、滅好菌的鑷子1把,剪刀1把;
8、酒精燈1臺(tái);
培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案:
以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案,必須參閱針對(duì)具體細(xì)胞的產(chǎn)品說明書。
1.配制凍存培養(yǎng)基,于2°C至8°C下儲(chǔ)存,直至使用。請(qǐng)注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。
2.凍存貼壁細(xì)胞時(shí),利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細(xì)胞所需完全培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。
3.采用血球計(jì)數(shù)器、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀按照臺(tái)盼藍(lán)拒染法或者使用自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測(cè)定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度,計(jì)算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液,不要攪動(dòng)細(xì)胞沉淀。
注:離心速度和時(shí)間取決于細(xì)胞種類。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀,將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。
6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時(shí),應(yīng)不時(shí)輕輕混合細(xì)胞,使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞,使溫度每分鐘大約降低 1°C。或者,將裝有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中,然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。
培養(yǎng)操作步驟 :
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片完全浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明 :
1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)玻璃**,并經(jīng)過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕;
4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率;
5.如果細(xì)胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
小鼠P物質(zhì)(SP)ELISA試劑盒
Betamethasone 378-44-9 中文名:倍他米松 分子式:C22H29FO5
小鼠P物質(zhì)(SP)ELISAKit Boldenone acetate 中文名:寶丹酮醋酸酯 分子式:C21H28O3
小鼠P物質(zhì)(mouse Substance P) 作用:
ELISA 規(guī)格: 48T/96T 進(jìn)口分裝
Ethyl 13-hydroxy-α-linolenate 中文名: 分子
****(標(biāo)準(zhǔn)品)
Etomidate 質(zhì)量規(guī)格:>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
Ratierferon-inducibleprotein10,IP-10ELISAKit大鼠干擾素誘導(dǎo)蛋白10(IP-10/CXCL10)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
N-乙酰神經(jīng)氨酸/唾液酸 N-Acetyl Neuraminic Acid/NANA/Neu5Ac/SA 質(zhì)量規(guī)格:度≥98.0% CASPASE-2蛋白表達(dá)ELISA定量檢測(cè)試劑盒25
紅霉素 Erythromycin 質(zhì)量規(guī)格:≥850 μg/mg,BR Mouselipoprotein-associatedphospholipaseA2,Lp-PL-A2ELISA試劑盒小鼠脂蛋白相關(guān)0脂酶A2(Lp-PL-A2)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
紅霉素(標(biāo)準(zhǔn)品) Erythromycin 質(zhì)量規(guī)格:標(biāo)準(zhǔn)品用于含量測(cè)定 小鼠熱休克蛋白20(Hsp-20)ELISA試劑盒 ,英文名: Hsp-20 ELISA Kit
鹽酸多巴酚丁胺 Dobutamine HCL 質(zhì)量規(guī)格:BR,細(xì)胞培養(yǎng)級(jí),度大于99%,USP29 小鼠血小板衍生生長因子(PDGF)ELISA檢測(cè)試劑盒Mouseplatelet-derivedgrowthfactor,PDGFELISAKit 96T/48T
羥丙基β環(huán)糊精;2-羥丙基-β-環(huán)糊精 HPCD 質(zhì)量規(guī)格:>98%,藥用級(jí) 人鈣結(jié)合蛋白S100A14 試劑盒 Human S100A14 ELISA Kit
羧甲基殼聚糖 Carboxymethyl chitosan 質(zhì)量規(guī)格:羧基化度80%,粘度10mPa.s~80mpa.s(cps);氧羧甲基 Ratierferon-inducibleprotein16,IFI16/p16ELISAKit大鼠γ干擾素誘導(dǎo)蛋白16/p16(IFI16/p16)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
依諾肝素鈉 Enoxaparin 質(zhì)量規(guī)格:BR,細(xì)胞培養(yǎng)級(jí);Anti-factor Xa activity(dried substance):90.0~125.0IU/mg;Anti-factor Ⅱa activity(dried substance) :20.0~35.0IU/mg。符合USP35標(biāo)準(zhǔn) CASPASE-2蛋白共沉淀分析試劑盒5
依諾肝素鈉(標(biāo)準(zhǔn)品) Enoxaparin 質(zhì)量規(guī)格:效價(jià)測(cè)定 MouseL-Phenylalanineammonla-lyase,PALELISA試劑盒小鼠L苯氨酸解氨酶(PAL)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
馬來酸曲美布?。?biāo)準(zhǔn)品)
Trimebutine maleate 質(zhì)量規(guī)格:含量測(cè)定 小鼠染色質(zhì)裝配因子1亞基B(CHAF1B)ELISA試劑盒 ,英文名: CHAF1B ELISA Kit
IL4(human、his標(biāo)簽)0ug8-Hydroxyhyperforin
8,1-hemiacetal5142
IL6(human、his標(biāo)簽)0ug8-Hydroxy-iodo-quinolinesulfonic acid5471喹碘方
EGFP熒光蛋白0ug/1mg8-Bromo-(but-yn-yl)-methylH-purine,6(3H,7H)-dione6668168
0bp DNA ladder(00bp) 0次8-Azaguanine13488-氮雜鳥嘌呤
0bp plus
DNA ladder(0000bp)0次8-Anilino-naphthalenesulfonic acid8268-苯胺-萘磺酸
收到如何處理:
1、首先,觀察培養(yǎng)瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有,請(qǐng)拍照,并及時(shí)與技術(shù)支持聯(lián)系(所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù))。
2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面,顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題,部分貼壁細(xì)胞會(huì)有少量從瓶壁脫落;先不要打開培養(yǎng)瓶蓋,將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時(shí),以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書,了解細(xì)胞相關(guān)信息,如貼壁特性(貼壁/懸?。?、細(xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后,取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶,鏡檢、拍照,記錄細(xì)胞狀態(tài)(所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù));建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后,定期拍照、記錄細(xì)胞生長狀態(tài)。
5、5637細(xì)胞貼壁細(xì)胞:若細(xì)胞生長密度超過80%,可正常傳代;若未超過80%,移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基,預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng),直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作,瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細(xì)胞:將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi),1200rpm離心5min,離心后上清培養(yǎng)基可收集備用,管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時(shí),若細(xì)胞密度超過80%,可將細(xì)胞懸液分至2個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng),補(bǔ)加培養(yǎng)基至5ml;若細(xì)胞密度未超過80%,將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng),直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時(shí)再進(jìn)行傳代操作。