實驗要點及說明 ：
1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法； 
2．所使用的蓋玻片應該為優(yōu)玻璃**，并經(jīng)過鉻酸洗液處理； 
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕； 
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率； 
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

產(chǎn)品詳細 腦神經(jīng)母細胞瘤細胞
形態(tài)特性 上皮樣
生長特性 貼壁生長
特征特性
培養(yǎng)條件 DMEM     O.1 mM Non-Essential Amino Acids (NEAA)

fetal bovine serum to a final conCA-ntration of 10%
傳代方法 1:4傳代，每周換液2次
我們的細胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實驗室擴增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無**、支原體污染。 細胞到達客戶手中，1個月內(nèi)出現(xiàn)任何問題，導致細胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費再向客戶提供一次。產(chǎn)品僅用于科學研究
實驗材料： 
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 
2. 100ml燒杯2個； 人皮膚成纖維細胞,CCC-HSF-1細胞
3、50ml離心筒2個 
4、培養(yǎng)皿1個，細胞培養(yǎng)瓶1個 
5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個；無菌玻璃攪拌棒1個 
6、細胞計數(shù)板1塊； 
7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把； 
8、酒精燈1臺； 

培養(yǎng)細胞凍存方案：
以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細胞凍存的一般流程。詳細的實驗方案，必須參閱針對具體細胞的產(chǎn)品說明書。 
1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲存，直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細胞系。
2.凍存貼壁細胞時，利用傳代時所用方法輕柔地使細胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細胞所需完全培養(yǎng)基重新懸浮細胞。
3.采用血球計數(shù)器、細胞計數(shù)儀按照臺盼藍拒染法或者使用自動細胞計數(shù)儀測定總細胞數(shù)和活細胞百分比。根據(jù)所需活細胞密度，計算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動細胞沉淀。
注：離心速度和時間取決于細胞種類。
5.用預冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細胞沉淀，將其調(diào)整至該細胞適合的活細胞密度。
6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時，應不時輕輕混合細胞，使其保持均勻的細胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞，使溫度每分鐘大約降低  1°C。或者，將裝有細胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。 
培養(yǎng)操作步驟 ：
1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布； 
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）； 
3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時； 
4．將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片完全浸在培養(yǎng)液中； 
5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及細胞化學檢測。 
細胞毒 T 細胞相關(guān)抗原 4(CTLA-4)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝  Araliadiol  1354638-93-9  中文名：  分子式：C15H20O2  度：%  關(guān)鍵詞：  ; 食用土當歸; 聚乙炔; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫

細胞凋亡抑制因子BCL-2   英文名稱：   Cell appoptosis inhibitory BCL-2   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   BCL-2  Antipyrine  60
膠原酶I型(sigma)  Collagenase, Type1  質(zhì)量規(guī)格：≥125 CDU/mg ,Sigma分裝 ELISAKitCys-C兔半胱氨酸蛋白酶抑制劑/胱抑素C規(guī)格：48T/96T

膠原酶II型(sigma)  Collagenase, Type2  質(zhì)量規(guī)格：≥125 CDU/mg ,Sigma分裝 小鼠胚胎干細胞系MESPU30(M30)ELISA試劑盒 ，英文名： M30 ELISA Kit

膠原酶IV型(sigma)  Collagenase, TypeIV  質(zhì)量規(guī)格：≥160 CDU/mg,Sigma分裝 小鼠Ⅰ型膠原(ColⅠ)ELISA檢測試劑盒MouseCollageypeⅠ,ColⅠELISAKit 96T/48T

鉬酸鈉二水(AR)   molybdate  質(zhì)量規(guī)格：>99%,AR 人肺炎衣原體抗體IgM(Cpn-IgM)試劑盒 Human Chlamydia pneumoniae aibody,Cpn-IgM ELISA Kit

硅酸鎂（高）  Magnesium silicate  質(zhì)量規(guī)格：>98% RatLeptieceptor,LR/Ob-RELISAKit大鼠苗條素受體(LR/Ob-R)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

L-抗壞血酸鈉   L-ascorbate  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR CMV(CYTOMEGALOVIRUS)病毒標準曲線定量PCR擴增檢測試劑盒2

焦鈉(AR)   pyrophosphate  質(zhì)量規(guī)格：>99%,AR Mousemyeloperoxidase,MPOELISA試劑盒小鼠髓過氧化物酶(MPO)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

碳酸氫銨(AR)  Ammonium bicarbonate  質(zhì)量規(guī)格：AR 小鼠膀胱腫瘤抗原(BTA)ELISA 試劑盒

氯化銨(AR)  Ammonium chloride  質(zhì)量規(guī)格：>99.5%,AR Rat noradrenaline (NA) ELISA Kit 大鼠去甲(NA)ELISA試劑盒

水楊酸(AR)  Salicylic acid  質(zhì)量規(guī)格：>99.5%,AR Humanurokinase-typeplasminogenactivator,uPA/PLAUELISAKit 人尿激酶型纖溶酶原激活物(uPA/PLAU)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝
Bialaphos 雙丙氨磷   0mg2,6-Dimethoxy-acetonylquinol22156

Bicine   g/25g/g2,6-Dimethoxy,4-benzoquinone552,6-二甲氧基對

Bis-Tris   5g /25g /0g 2,6-Bis(hydroxymethyl)-p-cresol1991/4/32,6-雙(羥甲基)對甲酚

Bis-Tris propane   5g/25g2,6-Bis(2-benzimidazolyl)pyridine232,6-雙(2-苯并咪唑基)吡啶

Bovogen BSA 低脂肪酸，無蛋白酶，低內(nèi)   0g 2,5-Bis(5-tert-butyl-benzoxazolyl)thiophene712842,5-雙(5-叔丁基-苯并惡唑基)噻吩
收到如何處理:
1、首先，觀察培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請拍照，并及時與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細胞置于細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時，以便穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
3、仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸浮）、細胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務依據(jù)）；建議細胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細胞：若細胞生長密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基，預留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6SK-N-FI細胞、懸浮細胞：將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時，若細胞密度超過80%，可將細胞懸液分至2個細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)，補加培養(yǎng)基至5ml；若細胞密度未超過80%，將細胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作。