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我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等,購買到貨后,由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存,凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測,100%進(jìn)口來源,100%保證5代以內(nèi),活力>95%,無**、支原體污染。 細(xì)胞到達(dá)客戶手中,1個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)任何問題,導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡,我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次。產(chǎn)品僅用于科學(xué)研究
產(chǎn)品名稱 |
SK-MEL-1細(xì)胞 |
規(guī)格 |
T25 |
貨號(hào) |
BH-0110080 |
產(chǎn)品詳細(xì) 皮膚黑色素瘤細(xì)胞
形態(tài)特性 球形的
生長特性 懸浮生長
特征特性 該細(xì)胞由Oettgen F及其同事從一名29歲的患有廣泛、快速進(jìn)展性惡性黑色素瘤的白人男性患者的胸導(dǎo)管中分離建立的。該細(xì)胞可產(chǎn)生黑色素,電鏡檢測發(fā)現(xiàn)細(xì)胞中色素顆粒與自身合成和吞噬作用相關(guān)。在63%的惡性黑色素瘤患者和10%其他**患者體內(nèi)發(fā)現(xiàn)了針對該細(xì)胞系的抗體。
培養(yǎng)條件 EMEM+10%FBS
傳代方法 維持細(xì)胞濃度在1×105~2×105,每周補(bǔ)液2~3次。
實(shí)驗(yàn)材料:
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶;8ml小牛血清(FCS) 1瓶;100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶;PBS(-)1 瓶
2. 100ml燒杯2個(gè); 人皮膚成纖維細(xì)胞,CCC-HSF-1細(xì)胞
3、50ml離心筒2個(gè)
4、培養(yǎng)皿1個(gè),細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個(gè)
5、1ml ,200μl移液器各1支;槍頭盒2個(gè);無菌玻璃攪拌棒1個(gè)
6、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊;
7、滅好菌的鑷子1把,剪刀1把;
8、酒精燈1臺(tái);
培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案:
以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案,必須參閱針對具體細(xì)胞的產(chǎn)品說明書。
1.配制凍存培養(yǎng)基,于2°C至8°C下儲(chǔ)存,直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。
2.凍存貼壁細(xì)胞時(shí),利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細(xì)胞所需完全培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。
3.采用血球計(jì)數(shù)器、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀按照臺(tái)盼藍(lán)拒染法或者使用自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度,計(jì)算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液,不要攪動(dòng)細(xì)胞沉淀。
注:離心速度和時(shí)間取決于細(xì)胞種類。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀,將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。
6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時(shí),應(yīng)不時(shí)輕輕混合細(xì)胞,使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞,使溫度每分鐘大約降低 1°C?;蛘撸瑢⒀b有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中,然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。
培養(yǎng)操作步驟 :
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片完全浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及細(xì)胞化學(xué)檢測。
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明 :
1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)玻璃**,并經(jīng)過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕;
4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率;
5.如果細(xì)胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
桿菌肽 50KU
4,6-Dichloro-5-nitro-2-propylthiopyrimidine 中文名: 分子式:C7H7Cl2N3O2S 度:98.0%
肝脂酶/脂蛋白脂酶檢測 Lipofuscin (excluding colorimeic detection) Racecadotril 中文名:消旋卡多曲 分子式:C21H23NO4S
肝素溶液
Heparin solion Ampicillin
Trihydrate 7177-48-2 中文名:氨芐西林
羅漢果皂苷Ⅲe mogroside III
e 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品 Rat phosphorylated protein kinase C
(P-PKC) ELISA Kit 大鼠0酸化蛋白激酶C(P-PKC)ELISA試劑盒
羅漢果黃素 Grosvenorine 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品 humangonadoopin-releasinghormone,GHELISAKit 人促性腺釋放(GH)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
白皮杉醇,3'-羥基白藜蘆醇;比杉特醇(標(biāo)準(zhǔn)品) Piceatannol 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥95%,標(biāo)準(zhǔn)品 Humanai-myelinaibodyIgA,AMAIgAELISA試劑盒人抗髓0脂抗體IgA(AMAIgA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
氯化鎂 Magnesium chloride 質(zhì)量規(guī)格:工業(yè)級(jí) 植物氫ATP酶(H+-ATPase)總活性比色法定量檢測試劑盒20
苜蓿素(標(biāo)準(zhǔn)品) Tricin 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品 humanuridinephosphorylase1,UPP1ELISAKit人尿嘧啶核苷0酸化酶1(UPP1)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
人參皂苷Rg5 GinsenosideRg5 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥95%,對照品 小鼠環(huán)加氧酶2(PTGS2)ELISA試劑盒 ,英文名: PTGS2 ELISA Kit
兒茶素沒食子酯酸 CG 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品 人蛋白二硫化物異構(gòu)酶A3(PDIA3)ELISA檢測試劑盒Humanproteindisulfide-isomeraseA3,PDIA3ELISAKit 96T/48T
氯化鎂銨,氯化銨鎂,六水合氯化鎂銨 AMMoniuM MagnesiuM chloride 質(zhì)量規(guī)格:CP 大鼠維生素D結(jié)合蛋白(DBP)試劑盒 Rat Vitamin D-binding protein,DBP ELISA Kit
訶子林鞣酸 Chebulinic acid 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥96%,標(biāo)準(zhǔn)品 英文名稱RatCytochromoP450ELISAKIT大鼠細(xì)胞色素P450規(guī)格:96T/48T
訶子鞣質(zhì),訶子鞣酸
Chebulagic acid 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥96%,標(biāo)準(zhǔn)品 核酸氧化8-氧脫氧鳥苷(8-oxo-dG)ELISA分析試劑盒48/96
人補(bǔ)體因子H(CFH)酶聯(lián)吸附測定試劑盒 別稱:CF-H, AHUS1, AMBP1, FH, FHL1, ARMD4,
ARMS1, CFHL3, HF, HF1, HF2, HUS Human CFH(Complement Factor H) ELISA Kit 用途 該試劑盒用于體外定量檢測Human 血清,血漿或其他生物體液中天然及部分重組CFH濃度
收到如何處理:
1、首先,觀察培養(yǎng)瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有,請拍照,并及時(shí)與技術(shù)支持聯(lián)系(所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù))。
2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面,顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題,部分貼壁細(xì)胞會(huì)有少量從瓶壁脫落;先不要打開培養(yǎng)瓶蓋,將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時(shí),以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書,了解細(xì)胞相關(guān)信息,如貼壁特性(貼壁/懸浮)、細(xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后,取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶,鏡檢、拍照,記錄細(xì)胞狀態(tài)(所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù));建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后,定期拍照、記錄細(xì)胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細(xì)胞:若細(xì)胞生長密度超過80%,可正常傳代;若未超過80%,移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基,預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng),直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作,瓶蓋可稍微擰松。
6、SK-MEL-1細(xì)胞懸浮細(xì)胞:將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi),1200rpm離心5min,離心后上清培養(yǎng)基可收集備用,管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時(shí),若細(xì)胞密度超過80%,可將細(xì)胞懸液分至2個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng),補(bǔ)加培養(yǎng)基至5ml;若細(xì)胞密度未超過80%,將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng),直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時(shí)再進(jìn)行傳代操作。