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培養(yǎng)操作步驟 :
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片完全浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及細(xì)胞化學(xué)檢測。
產(chǎn)品名稱 |
SK-MEL-24細(xì)胞 |
規(guī)格 |
T25 |
貨號 |
BH-0110082 |
產(chǎn)品詳細(xì) 惡性黑色素瘤細(xì)胞
形態(tài)特性 星形的
生長特性 貼壁生長
特征特性
培養(yǎng)條件 Minimum essential medium (Eagle) in Earle's BSS with
nonessential amino acids and sodium pyruvate, 85%; fetal bovine serum, 15%
傳代方法 1:2-1:4傳代,2-3天換液1次。
實驗材料:
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶;8ml小牛血清(FCS) 1瓶;100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶;PBS(-)1 瓶
2. 100ml燒杯2個; 人皮膚成纖維細(xì)胞,CCC-HSF-1細(xì)胞
3、50ml離心筒2個
4、培養(yǎng)皿1個,細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個
5、1ml ,200μl移液器各1支;槍頭盒2個;無菌玻璃攪拌棒1個
6、細(xì)胞計數(shù)板1塊;
7、滅好菌的鑷子1把,剪刀1把;
8、酒精燈1臺;
培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案:
以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實驗方案,必須參閱針對具體細(xì)胞的產(chǎn)品說明書。
1.配制凍存培養(yǎng)基,于2°C至8°C下儲存,直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。
2.凍存貼壁細(xì)胞時,利用傳代時所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細(xì)胞所需完全培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。
3.采用血球計數(shù)器、細(xì)胞計數(shù)儀按照臺盼藍(lán)拒染法或者使用自動細(xì)胞計數(shù)儀測定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度,計算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液,不要攪動細(xì)胞沉淀。
注:離心速度和時間取決于細(xì)胞種類。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀,將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。
6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時,應(yīng)不時輕輕混合細(xì)胞,使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞,使溫度每分鐘大約降低 1°C。或者,將裝有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中,然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。
實驗要點及說明 :
1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)玻璃**,并經(jīng)過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率;
5.如果細(xì)胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
收到如何處理:
1、首先,觀察培養(yǎng)瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有,請拍照,并及時與技術(shù)支持聯(lián)系(所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù))。
2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面,顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運輸問題,部分貼壁細(xì)胞會有少量從瓶壁脫落;先不要打開培養(yǎng)瓶蓋,將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時,以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書,了解細(xì)胞相關(guān)信息,如貼壁特性(貼壁/懸?。?、細(xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后,取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶,鏡檢、拍照,記錄細(xì)胞狀態(tài)(所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù));建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后,定期拍照、記錄細(xì)胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細(xì)胞:若細(xì)胞生長密度超過80%,可正常傳代;若未超過80%,移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基,預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng),直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進行傳代操作,瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細(xì)胞:將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi),1200rpm離心5min,離心后上清培養(yǎng)基可收集備用,管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時,若細(xì)胞密度超過80%,可將細(xì)胞懸液分至2個細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng),補加培養(yǎng)基至5ml;若細(xì)胞密度未超過80%,將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng),直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時再進行傳代操作。
甘油三酯(TG)含量測定試劑盒
可見分光光度法 50管/48樣 Atractylodin 中文名:蒼術(shù)素 分子式:C13H10O
甘油0酸 10g Androstenediol-3-acetate 中文名:雄甾烯二醇-3-乙酸酯 分子式:C21H32O3 度:98.0%
甘露聚糖結(jié)合凝集素絲酸肽酶-2
英文名稱: mannan-binding
lectin associated serine proteases 規(guī)格: 48T/96T
V
Lup-20(29)-en-28-oic acid, 3-[β-D-glucopyranosyl(1→4)[a-L-rhamnopyranosyl) (1→2)-a -L-arabinopyranosyl]oxy], (3β,4a)-) 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品 英文名稱RatCytochromeCELISAKit大鼠細(xì)胞色素C(CytochromeC)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
V Hederagenin 3-O-α-L-rhamnopyranosyl(1→2)-(β-D-glucopyranosyl(1→4))-α-L-arabinopyranoside 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品 核酸氧化8-氧脫氧鳥苷(8-oxo-dG)高效液相色譜(HPLC)分析試劑盒20
GDC0994 GDC-0994 質(zhì)量規(guī)格:ERK1/2 抑制劑 ELISAKitHSA人血清白蛋白規(guī)格:48T/96T
氨三乙酸 Nitrilotriacetic acid 質(zhì)量規(guī)格:AR 小鼠環(huán)胍酸肽(CCP)ELISA試劑盒 ,英文名: CCP ELISA Kit
靈芝酸I(標(biāo)準(zhǔn)品) Ganoderic acid I 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品 人2,3-二0酸甘油酸(2,3-DPG)ELISA檢測試劑盒Human2,3-Disphosphoglycerate,2,3-DPGELISAKit 96T/48T
苦蘇花皂苷C Cussosaponin C 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品 大鼠維生素D2(VD2)試劑盒 Rat Vitamin D2,VD2 ELISA Kit
常春藤苷C Hederacoside C 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品 英文名稱RatCytochromeCELISAKit大鼠細(xì)胞色素C(CytochromeC)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
Hederacolchiside E Hederacolchiside E 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品 核桃誘導(dǎo)(DKWJuglans)培養(yǎng)基500毫升溶液/片劑
3-O-β-D-葡萄糖( 1→3)- a -L-鼠李糖(1→2)- a-L-阿拉伯糖 齊墩果酸– 28-O-鼠李糖(1→4)葡萄糖(1→6)葡萄糖苷 V 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品 ELISAKitHA人血凝素規(guī)格:48T/96T
3-O-b-D-葡萄糖( 1→4)-[ a -L-鼠李糖(1→2)]- a-L-阿拉伯糖 23-羥基羽扇豆20(29)-烯-28–酸- 28-O-鼠李糖(1→4)葡萄糖(1→6)葡萄糖苷
V 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品 小鼠環(huán)孢素A(CsA)ELISA試劑盒 ,英文名: CsA ELISA Kit
SK-MEL-24細(xì)胞人Ⅱ型膠原α1(COL2α1)酶聯(lián)吸附測定試劑盒 別稱:COL2A1, ANFH, AOM, COL11A3, SEDC Human
COL2α1(Collagen Type Ⅱ Alpha 1) ELISA Kit 用途 該試劑盒用于體外定量檢測Human 血清,血漿或其他生物體液中天然及部分重組COL2α1濃度
我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等,購買到貨后,由我們實驗室擴增、凍存,凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測,100%進口來源,100%保證5代以內(nèi),活力>95%,無**、支原體污染。 細(xì)胞到達(dá)客戶手中,1個月內(nèi)出現(xiàn)任何問題,導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡,我們公司都可以免費再向客戶提供一次。產(chǎn)品僅用于科學(xué)研究