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產(chǎn)品名稱 |
KATO III細胞 |
規(guī)格 |
T25 |
貨號 |
BH-0110095 |
產(chǎn)品詳細 胃癌細胞
形態(tài)特性 上皮細胞
生長特性 貼壁生長
特征特性
培養(yǎng)條件 IMDM+20%FBS
傳代方法 1:2。3天內(nèi)可長滿。
細胞生物學研究有以下幾個方面。產(chǎn)品僅用于科學研究
細胞生物學的研究內(nèi)容十分廣泛,主要包括。
①細胞核、染色體以及基因表達的研究。
②生物膜與細胞器的研究。
③細胞骨架體系的研究。
④細胞增殖及其調(diào)控。
⑤細胞分化及其調(diào)控。
⑥細胞的衰老與編程性死亡(凋亡)。
⑦細胞的起源與進化。
⑧細胞工程。
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將組織剪成1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織完全被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
培養(yǎng)操作:
1)復蘇細胞:將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜(或?qū)?細胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。天換液并 檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達 80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM
EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,棄去上清液,補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類;
1. 細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶,細胞變圓 脫 落后,加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞,根據(jù)細胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO,輕輕混勻,DMSO 終濃度為 10%,細胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液,注意凍 存管做好標識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
大鼠降鈣素 英文名稱: calcitonin 規(guī)格:
48T/96T 英文縮寫: CAL Procaine
中文名:鹽酸普魯卡因 分子式:C13H21ClN2O2
大鼠激酶M2型同工酶(M2-PK)ELISAKit Toltrazuril 69004-03-1 中文名:托曲珠利 分子式:C18H14F3N3O4S 度:98.0%
大鼠活化素A受體抗體(ACV-RAb)ELISAKit Periplocoside M 中文名:北五加皮苷M
4,4'-雙甲氧基三苯甲基氯
DMT-CL 質(zhì)量規(guī)格:>97% Rat phosphotylinosital 3 kinase (PI3K) ELISA Kit 大鼠0酸肌醇3激酶(PI3K)ELISA試劑盒
N-苯甲酰-N-苯基羥胺;鉭試劑;BPHA N-Phenylbenzohydroxamic Acid;Tantalon 質(zhì)量規(guī)格:>98%;AR humanAzidothymidine,AZTELISAKit 人疊氮胸苷(AZT)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝
6-氯鳥嘌呤核苷 6-Chloroguanosine 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR Humanai-myelinassociatedglycoproteinaibody,MAGAbELISA試劑盒人抗髓鞘相關(guān)糖蛋白抗體(MAGAb)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
肌苷-5'-三三鈉鹽 ITP?Na3 質(zhì)量規(guī)格:>95%,BR 植物染色質(zhì)沉淀分析(CHIP)試劑盒10
鳥苷-5'-三二鈉鹽 GTP.Na2 質(zhì)量規(guī)格:>95%,BR HumanUreaplasmaurealyticumaibody,UU-AbELISAKit人解脲脲原體抗體(UU-Ab)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
腺苷-5'-二三鋰鹽 ADP.Li3 質(zhì)量規(guī)格:>97%,BR 小鼠紅細胞**素受體(EPOR)ELISA試劑盒 ,英文名: EPOR ELISA Kit
赤蘚醇;赤蘚糖醇 Erythritol 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR 大鼠補體片斷5a(C5a)ELISA檢測試劑盒RatComplemefragme5a,C5aELISAKit 96T/48T
5ˊ-二腺苷鋇鹽 ADP.Ba 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR 人補體1抑制物抗體-IgG(C1INH-IgG)試劑盒 Human Compleme 1 inhibitor aoaibody-IgG,C1INH-IgG ELISA Kit
二腺苷單鉀鹽 ADP.K 質(zhì)量規(guī)格:>97%,BR Ratansforminggrowthfactorsβ2,TGFβ2ELISAKit大鼠轉(zhuǎn)化生長因子β2(TGFβ2)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
肌苷-5'-二二鈉鹽
IDP.Na2 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR McCOY’S5A培養(yǎng)基1/10升(片劑)
人丙酮酸激酶M2型同工酶(PKM2)酶聯(lián)吸附測定試劑盒 別稱:PKM, CTHBP, HEL-S-30, OIP3, PK3, PKM2,
TCB, THBP1, pyruvate kinase M1/2,Tumor M2-PK,p58 Human PKM2(Pyruvate Kinase,
Muscle) ELISA Kit 用途 該試劑盒用于體外定量檢測Human 血清,血漿或其他生物體液中天然及部分重組PKM2濃度
細胞培養(yǎng)的優(yōu)點:
1.研究的對象是活細胞
在實驗過程中,根據(jù)要求可始終保持細胞活力,并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況,包括活細胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件,可以根據(jù)實際進行人為的控制,同時,可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察,這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過細胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞,需要時,可采用克隆化等方法使細胞達到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術(shù):如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器設備 記錄方式可采用攝影照片、縮時電影、電視等多種手段。
5.研究的范圍比較廣泛
KATO III細胞應用的學科領(lǐng)域較為寬廣,如細胞學、腫瘤學、生物化學、遺傳學、分子生物學等;
適用的對象范圍廣,從低等動物到高等動物,一種動物的不同年齡階段以及不同組織,都可進行有針對性的研究。
6.研究的費用相對較經(jīng)濟
可提供大量、同一時期、重復性好的、生物學性狀相似的實驗對象。