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實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明 :
1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)玻璃**,并經(jīng)過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕;
4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率;
5.如果細(xì)胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
產(chǎn)品名稱 |
Rat Cryopreserved Hepatocytes細(xì)胞 |
規(guī)格 |
T25 |
貨號(hào) |
BH-0110224 |
產(chǎn)品詳細(xì) 大鼠肝臟實(shí)質(zhì)細(xì)胞
形態(tài)特性 上皮樣
生長特性 貼壁生長
特征特性
培養(yǎng)條件
傳代方法
我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等,購買到貨后,由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存,凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測,100%進(jìn)口來源,100%保證5代以內(nèi),活力>95%,無**、支原體污染。 細(xì)胞到達(dá)客戶手中,1個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)任何問題,導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡,我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次。產(chǎn)品僅用于科學(xué)研究
實(shí)驗(yàn)材料:
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶;8ml小牛血清(FCS) 1瓶;100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶;PBS(-)1 瓶
2. 100ml燒杯2個(gè); 人皮膚成纖維細(xì)胞,CCC-HSF-1細(xì)胞
3、50ml離心筒2個(gè)
4、培養(yǎng)皿1個(gè),細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個(gè)
5、1ml ,200μl移液器各1支;槍頭盒2個(gè);無菌玻璃攪拌棒1個(gè)
6、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊;
7、滅好菌的鑷子1把,剪刀1把;
8、酒精燈1臺(tái);
培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案:
以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案,必須參閱針對(duì)具體細(xì)胞的產(chǎn)品說明書。
1.配制凍存培養(yǎng)基,于2°C至8°C下儲(chǔ)存,直至使用。請(qǐng)注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。
2.凍存貼壁細(xì)胞時(shí),利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細(xì)胞所需完全培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。
3.采用血球計(jì)數(shù)器、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀按照臺(tái)盼藍(lán)拒染法或者使用自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度,計(jì)算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液,不要攪動(dòng)細(xì)胞沉淀。
注:離心速度和時(shí)間取決于細(xì)胞種類。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀,將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。
6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時(shí),應(yīng)不時(shí)輕輕混合細(xì)胞,使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞,使溫度每分鐘大約降低 1°C?;蛘撸瑢⒀b有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中,然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。
培養(yǎng)操作步驟 :
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片完全浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及細(xì)胞化學(xué)檢測。
CLIAKitforBeta2-GP1IgA/G/M(MouseBeta2-glycoprotein1aibodyIgA/G/M)ELISAKit小鼠β2糖蛋白1抗體IgA/G/M規(guī)格:48T/96T
2-Amino-2'-chloro-5-nitro benzophenone
中文名:2-氨基-5-硝基-2'-氯二苯甲酮 分子式:C13H9ClN2O3
CLIAKitforBeta2-GP1IgA/G/M(HumanBeta2-glycoprotein1aibodyIgA/G/M)ELISAK
大觀霉素(標(biāo)準(zhǔn)品)
spectinomycin 質(zhì)量規(guī)格:效價(jià)測定 ELISAKitcytovillin/ezrin人細(xì)胞絨毛蛋白/埃茲蛋白規(guī)格:48T/96T
5-甲基四氫葉酸 5-MTHF;5-Methyltetrahydrofolic Acid Calcium Salt Trihydrate 質(zhì)量規(guī)格:進(jìn)口,鈣鹽三水合物 小鼠鈣非依賴型0脂酶A2(iPLA2)ELISA試劑盒 ,英文名: iPLA2 ELISA Kit
吉它霉素(標(biāo)準(zhǔn)品) Kitasamycin 質(zhì)量規(guī)格:效價(jià)測定 大鼠色素上皮衍生因子(PEDF)ELISA檢測試劑盒Ratpigmeepithelium-derivedfactor,PEDFELISAKit 96T/48T
交沙霉素(標(biāo)準(zhǔn)品) josamycin 質(zhì)量規(guī)格:效價(jià)測定 人白介素24(IL-24)試劑盒 Human IL-24 ELISA Kit
醋酸麥迪霉素(標(biāo)準(zhǔn)品) Midecamycin Acetate 質(zhì)量規(guī)格:效價(jià)測定 英文名稱MouseTissuePolypeptideAigenELISAKit小鼠組織多肽抗原(TPA)規(guī)格:96T/48T
依替米星(標(biāo)準(zhǔn)品) Etimicin 質(zhì)量規(guī)格:效價(jià)測定 PCR級(jí)無離子水500毫升
巴龍霉素(標(biāo)準(zhǔn)品) Paromomycin 質(zhì)量規(guī)格:效價(jià)測定 Porcine-glucosecoanspoer1,GSLT1ELISA試劑盒豬-葡萄糖共轉(zhuǎn)運(yùn)載體1(GSLT1)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
拉寧(標(biāo)準(zhǔn)品) Teicoplanin 質(zhì)量規(guī)格:效價(jià)測定 小鼠鈣蛋白酶抑制蛋白(CAST)ELISA試劑盒 ,英文名: CAST ELISA Kit
制霉菌素(標(biāo)準(zhǔn)品) Nystatin 質(zhì)量規(guī)格:效價(jià)測定 人肌球蛋白輕鏈(MLC)ELISA檢測試劑盒HumanMyosinlightChain,MLCELISAKit 96T/48T
肌苷5'-單
Inosine 5'-Monophosphate(IMP) 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR 大鼠肉堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶-Ⅰ(CPT1)試劑盒 Rat Carnitine palmitoylansferase I,CPT1
ELISA kit
人嗅素4(OLFM4)酶聯(lián)吸附測定試劑盒 別稱:OLFM4, GC1, GW112, OLM4, OlfD, UNQ362,
bA209J19.1, hGC-1, hOLfD, olfactomedin 4 Human OLFM4(Olfactomedin 4) ELISA Kit 用途 該試劑盒用于體外定量檢測Human 血清,血漿或其他生物體液中天然及部分重組OLFM4濃度
收到如何處理:
1、首先,觀察培養(yǎng)瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有,請(qǐng)拍照,并及時(shí)與技術(shù)支持聯(lián)系(所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù))。
2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面,顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題,部分貼壁細(xì)胞會(huì)有少量從瓶壁脫落;先不要打開培養(yǎng)瓶蓋,將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時(shí),以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書,了解細(xì)胞相關(guān)信息,如貼壁特性(貼壁/懸?。?、細(xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后,取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶,鏡檢、拍照,記錄細(xì)胞狀態(tài)(所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù));建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后,定期拍照、記錄細(xì)胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細(xì)胞:若細(xì)胞生長密度超過80%,可正常傳代;若未超過80%,移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基,預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng),直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作,瓶蓋可稍微擰松。
6、Rat Cryopreserved Hepatocytes細(xì)胞懸浮細(xì)胞:將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi),1200rpm離心5min,離心后上清培養(yǎng)基可收集備用,管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時(shí),若細(xì)胞密度超過80%,可將細(xì)胞懸液分至2個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng),補(bǔ)加培養(yǎng)基至5ml;若細(xì)胞密度未超過80%,將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng),直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時(shí)再進(jìn)行傳代操作。