下列是公司產(chǎn)品ELISA試劑盒的詳細(xì)說(shuō)明書(shū)：
中文名稱(chēng)：NFκB人核因子κB免費(fèi)代測(cè)試劑盒
英文簡(jiǎn)稱(chēng)：Human Nuclear Factor Kappa B(NFkB)ELISA Kit

產(chǎn)品貨號(hào)：PH101707

規(guī)格：96T/48T
適用范圍：僅供科研使用
保存及有效期：2-8℃保存，6個(gè)月，-20℃一年

試劑和樣本的控制方法：

一、試劑
1.試劑的選擇：國(guó)家明確要求要采用批批檢定的形式對(duì)ELISA試劑嚴(yán)格把關(guān)，我司嚴(yán)格按照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行生產(chǎn)，已獲得國(guó)家承認(rèn)的“三證”，每一個(gè)產(chǎn)品都有對(duì)應(yīng)的生產(chǎn)批號(hào)，只要客戶(hù)提前下單，我們就能為您提供新批次的產(chǎn)品，不必?fù)?dān)心會(huì)有過(guò)期的試劑。我司的試劑，值得您選擇。
2.試劑的準(zhǔn)備：先將試劑盒先從冰箱中拿出來(lái)，在室溫下放置20-30 min后，再進(jìn)行測(cè)定，使試劑盒在使用前與室溫平衡，這樣做的目的能使反應(yīng)微孔內(nèi)的溫度較快地達(dá)到所需的溫度，以滿(mǎn)足后面的測(cè)定需求。
二、樣本
1.內(nèi)源性干擾因素：包括類(lèi)風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、高濃度的非特異球蛋白、異嗜性抗體、某些自身抗體等；
類(lèi)風(fēng)濕因子的控制方法：
①用F(ab)2替代完整的IgG；
②標(biāo)本用聯(lián)有熱變性IgG的固相吸附劑處理；
③檢測(cè)抗原時(shí)，可用2-巰基乙醇加入到標(biāo)本稀釋液中使RF降解。
檢測(cè)程序：
1.  加樣：每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品 100ul ，將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘。
2.  洗板：用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌 4-6 次，向?yàn)V紙上印干。
3.  每孔中加入抗體工作液10 0ul 。將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘。
4.  洗板：同前。
5.  每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul 。將反應(yīng)板置 37 ℃ 3 0 分鐘。
6.  洗板：同前。
7.  每孔加入底物工作液100ul ，置 37   ℃ 暗處反應(yīng)15 分鐘。
8.  每孔加入100ul 終止液混勻。
9.  30分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在 45 0 nm 處測(cè) 吸光值。

使用方法：
測(cè)定法的靈敏度來(lái)自作為報(bào)告的酶。眾所周知，酶是一種有機(jī)催化劑，很少量的酶即可誘導(dǎo)大量的催化反應(yīng)，產(chǎn)生可供觀(guān)察的顯色反應(yīng)現(xiàn)象。因此該體系常被稱(chēng)為酶放大體系。
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋?zhuān)罕驹噭┖刑峁┰稑?biāo)準(zhǔn)品一支，用戶(hù)可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。   24μg/ml    5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品    150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
 12μg/ml    4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品    150μl的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
 6μg/ml     3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品    150μl的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
 3μg/ml     2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品    150μl的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
 1.5μg/ml   1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品    150μl的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
2. 加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。|
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   
4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
11. 測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以?xún)?nèi)進(jìn)行。

亞硫酸鹽-多粘菌素-磺胺嘧啶瓊脂基礎(chǔ)(SPS) 250g 用于食品和礦泉水中產(chǎn)氣莢膜梭菌的分離培養(yǎng)和計(jì)數(shù)(GB/T 8538-2008，GB/T4789.28-2003中4.69，GB/...
液體硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基(FT) 250g 用于培養(yǎng)需氧菌、微需氧菌，還用于藥品生物制品的無(wú)菌試驗(yàn)，及食品中產(chǎn)氣莢膜羧菌的厭氧...
胰月示-亞硫酸鹽-環(huán)絲氨酸瓊脂基礎(chǔ)(TSC) 100g 用于食品和臨床樣本中產(chǎn)氣莢膜梭菌的分離培養(yǎng)和計(jì)數(shù)(SN0177-92，ISO標(biāo)準(zhǔn))。
卵黃瓊脂培養(yǎng)基基礎(chǔ) 250g 用于厭氧梭狀芽孢桿菌的分離培養(yǎng)和卵磷脂酶試驗(yàn)(GB/T 8538-2008，GB/T4789.28-2003中4.68，GB/T4...
庖肉培養(yǎng)基基礎(chǔ) 250g 用于的增菌培養(yǎng)和保存，還用于肉毒梭菌及兼性厭氧和厭氧梭狀芽孢桿菌的檢驗(yàn)(GB/T 8538-200...
緩沖-甘油氯化鈉溶液 250g 用于樣品的保存。（GB 4789.13-2010）
哥倫比亞瓊脂培養(yǎng)基 250g 用于營(yíng)養(yǎng)要求較高的的培養(yǎng)及溶血試驗(yàn)，還用于藥品中梭菌的檢測(cè)。(《中華人民共和國(guó)藥典》201...
Pfizer選擇性腸球菌瓊脂培養(yǎng)基 100g 用于多管發(fā)酵法測(cè)定水中腸球菌的確證試驗(yàn)(CJ/T148-2001和SN/T2206.5-2009)。
膽汁液態(tài)培養(yǎng)基 100g 用于飲用天然礦泉水中糞鏈球菌濾膜法的確證實(shí)驗(yàn)。（GB/T 8538-2008）
腦—心浸萃瓊脂培養(yǎng)基 100g 廣泛用于霉菌、酵母、培養(yǎng)，包括營(yíng)養(yǎng)要求較高的微生物的培養(yǎng)，特別用于礦泉水和城市供水中...
腦—心浸萃液態(tài)培養(yǎng)基 100g 廣泛用于霉菌、酵母、的培養(yǎng)，包括營(yíng)養(yǎng)要求較高的微生物的培養(yǎng)，特別用于飲用天然礦泉水和城...
KF鏈球菌瓊脂培養(yǎng)基 100g 用于糞性鏈球菌濾膜法選擇性培養(yǎng)和計(jì)數(shù)(GB/T8538-2008，SN/T2206.5-2009和CJ/T148-2001)。
疊氮化物葡萄糖液態(tài)培養(yǎng)基 250g 用于水和污水中糞性鏈球菌發(fā)酵法的推測(cè)試驗(yàn)(CJ/T148-2001和SN/T2206.5-2009)。
產(chǎn)品名稱(chēng) 規(guī)格 用途
MRS培養(yǎng)基(莫匹羅星鋰鹽改良MRS培養(yǎng)基基礎(chǔ)) 250g 用于乳酸菌的分離、計(jì)數(shù)和培養(yǎng)，每100mL培養(yǎng)基添加1支配套試劑(SR0370)，可單獨(dú)用于雙歧桿菌的分...
MRS肉湯培養(yǎng)基 250g 用于乳酸菌的培養(yǎng)
乳酸桿菌瓊脂培養(yǎng)基 250g 用于維生素檢測(cè)菌種的培養(yǎng)基
乳酸桿菌肉湯培養(yǎng)基 250g 用于維生素檢測(cè)菌種的培養(yǎng)基
改良番茄汁瓊脂培養(yǎng)基基礎(chǔ) 250g 用于乳酸菌飲料中乳酸菌的菌落計(jì)數(shù)
MC培養(yǎng)基 250g 用于乳酸菌飲料中乳酸菌的菌落計(jì)數(shù)

ELISA 試驗(yàn)時(shí)，注意事項(xiàng)如下： 
     1. 正式試驗(yàn)時(shí)，應(yīng)分別以陽(yáng)性對(duì)照與陰性對(duì)照控制試驗(yàn)條件，待檢樣品應(yīng)作一式二份，以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。有時(shí)本底較高，說(shuō)明有非特異性反應(yīng)，可采用羊血清、兔血清或BSA等封閉。 
     2. 在ELISA中，進(jìn)行各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)條件的選擇是很重要的，其中包括: 
     （1） 固相載體的選擇：許多物質(zhì)可作為固相載體，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體，在使用前均可進(jìn)行篩選：用等量抗原包被，在同一實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行反應(yīng)，觀(guān)察其顯色反應(yīng)是否均一性，據(jù)此判明其吸附性能是否良好。 
     （2） 包被抗體（或抗原）的選擇：將抗體（或抗原）吸附在固相載體表面時(shí)，要求純度要好,吸附時(shí)一般要求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度，時(shí)間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18～24小時(shí)。蛋白質(zhì)包被的zui適濃度需進(jìn)行滴定：即用不同的蛋白質(zhì)濃度（0.1、1.0和10μg／ml等）進(jìn)行包被后，在其它試驗(yàn)條件相同時(shí)，觀(guān)察陽(yáng)性標(biāo)本的OD值。選擇OD值z(mì)ui大而蛋白量zui少的濃度。對(duì)于多數(shù)蛋白質(zhì)來(lái)說(shuō)通常為1～10μg／ml。 
     （3） 酶標(biāo)記抗體工作濃度的選擇：首先用直接ELISA法進(jìn)行初步效價(jià)的滴定（見(jiàn)酶標(biāo)記抗體部份）。然后再固定其它條件或采取“方陣法”（包被物、待檢樣品的參考品及酶標(biāo)記抗體分別為不同的稀釋度）在正式實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)里準(zhǔn)確地滴定其工作濃度。 

     （4） 酶的底物及供氫體的選擇：對(duì)供氫體的選擇要**價(jià)廉、**、有明顯地顯色反應(yīng)，而本身無(wú)色。有些供氫體（如OPD等）有潛在的致癌作用，應(yīng)注意防護(hù)。有條件者應(yīng)使用不致癌、靈敏度高的供氫體，如TMB和ABTS是目前較為滿(mǎn)意的供氫體。底物作用一段時(shí)間后，應(yīng)加入強(qiáng)酸或強(qiáng)堿以終止反應(yīng)。通常底物作用時(shí)間，以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制，尤其是H2O2在臨用前加入 。