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培養(yǎng)操作步驟 :
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片完全浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
產(chǎn)品名稱 |
CAL 27細(xì)胞 |
規(guī)格 |
T25 |
貨號(hào) |
BH-0110136 |
產(chǎn)品詳細(xì) 舌鱗癌細(xì)胞
形態(tài)特性 上皮樣
生長(zhǎng)特性 貼壁生長(zhǎng)
特征特性 該細(xì)胞1982年由J.Gioanni建系,源自一位56歲白人男性的舌頭中倍的病變部位,角蛋白強(qiáng)陽(yáng)性。
培養(yǎng)條件 DMEM(高糖)+10%FBS
傳代方法 1:2~1:4傳代;2~3天換液1次
實(shí)驗(yàn)材料:
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶;8ml小牛血清(FCS) 1瓶;100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶;PBS(-)1 瓶
2. 100ml燒杯2個(gè); 人皮膚成纖維細(xì)胞,CCC-HSF-1細(xì)胞
3、50ml離心筒2個(gè)
4、培養(yǎng)皿1個(gè),細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個(gè)
5、1ml ,200μl移液器各1支;槍頭盒2個(gè);無(wú)菌玻璃攪拌棒1個(gè)
6、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊;
7、滅好菌的鑷子1把,剪刀1把;
8、酒精燈1臺(tái);
培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案:
以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案,必須參閱針對(duì)具體細(xì)胞的產(chǎn)品說(shuō)明書。
1.配制凍存培養(yǎng)基,于2°C至8°C下儲(chǔ)存,直至使用。請(qǐng)注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。
2.凍存貼壁細(xì)胞時(shí),利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來(lái)。用該細(xì)胞所需完全培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。
3.采用血球計(jì)數(shù)器、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀按照臺(tái)盼藍(lán)拒染法或者使用自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測(cè)定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度,計(jì)算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無(wú)菌條件下小心倒掉上清液,不要攪動(dòng)細(xì)胞沉淀。
注:離心速度和時(shí)間取決于細(xì)胞種類。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀,將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。
6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時(shí),應(yīng)不時(shí)輕輕混合細(xì)胞,使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞,使溫度每分鐘大約降低 1°C?;蛘?,將裝有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中,然后將凍存盒置于-80°C條件下過(guò)夜。
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明 :
1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)玻璃**,并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕;
4.如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過(guò)大,以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率;
5.如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
收到如何處理:
1、首先,觀察培養(yǎng)瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有,請(qǐng)拍照,并及時(shí)與技術(shù)支持聯(lián)系(所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù))。
2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面,顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題,部分貼壁細(xì)胞會(huì)有少量從瓶壁脫落;先不要打開培養(yǎng)瓶蓋,將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時(shí),以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書,了解細(xì)胞相關(guān)信息,如貼壁特性(貼壁/懸?。?、細(xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后,取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶,鏡檢、拍照,記錄細(xì)胞狀態(tài)(所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù));建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后,定期拍照、記錄細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)。
5、貼壁細(xì)胞:若細(xì)胞生長(zhǎng)密度超過(guò)80%,可正常傳代;若未超過(guò)80%,移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)基,預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng),直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作,瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細(xì)胞:將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無(wú)菌離心管內(nèi),1200rpm離心5min,離心后上清培養(yǎng)基可收集備用,管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時(shí),若細(xì)胞密度超過(guò)80%,可將細(xì)胞懸液分至2個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng),補(bǔ)加培養(yǎng)基至5ml;若細(xì)胞密度未超過(guò)80%,將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng),直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時(shí)再進(jìn)行傳代操作。
P 物質(zhì) (Substance P) 作用:
ELISA 規(guī)格: 48T/96T 進(jìn)口分裝
Anthraflavic acid 中文名:二羥蒽醌 分子式:C14H8O4 度:98.0%
OX-40 ELISA Kit 作用: ELISA 規(guī)格: 96T 奧地利 Bender 3-Methoxyfuran 中文名: 分子式:C5H6O2 度:99.0%
N-三(羥甲基)甲基甘酸
500g
3-Amino-5-phenylpyrazole 中文名
羌活醇(標(biāo)準(zhǔn)品) Notopterol 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
RatVascularEndothelialcellGrowthFactorC,VEGF-CELISAKit大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子C(VEGF-C)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
10-羥基癸酸(標(biāo)準(zhǔn)品) 10-Hydroxydecanoic acid 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥96%,標(biāo)準(zhǔn)品 NINHYDRIN蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒100
羥基紅花黃色素A(標(biāo)準(zhǔn)品) Hydroxysafflor yellow A 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品 PorcineHyaluronicacid,HAELISA試劑盒豬透明質(zhì)酸(HA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
馬兜鈴酸A去甲基代謝產(chǎn)物 Aristolochic Acid Ia 質(zhì)量規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口 小鼠胱天蛋白酶9(CASP9)ELISA試劑盒 ,英文名: CASP9 ELISA Kit
羥基積雪草苷(標(biāo)準(zhǔn)品) Madecassoside 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品 人0酯酶Cγ鏈(PLCγ1)ELISA檢測(cè)試劑盒HumanPhospholipaseCγ1,PLCγ1ELISAKit 96T/48T
羥基積雪草酸(標(biāo)準(zhǔn)品) Madecassic acid 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品 大鼠糖蛋白130(gp130)試劑盒 Rat glucoprotein 130,gp130 ELISA KIT
羥基積雪草酸 Madecassic acid 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥80%,BR 英文名稱RatAquaporin0ELISAKit大鼠水通道蛋白0(AQP0)規(guī)格:96T/48T
海柯皂苷元 Hecogenin 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥95%,標(biāo)準(zhǔn)品 化妝品乙酰舒泛(acesulfameK)含量高效液相色譜法定量檢測(cè)試劑盒20
靈芝酸 B Ganoderic acid B 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品 ELISAKitVIP人血管活性腸肽規(guī)格:48T/96T
異夏佛塔苷
Isoschaftoside 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品 小鼠胱天蛋白酶9(Casp-9)ELISA試劑盒 ,英文名: Casp-9 ELISA Kit
人載脂蛋白B(ApoB)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒 別稱:APOB, FLDB, LDLCQ4, apoB-100, apoB-48,
apolipoprotein B Human ApoB(Apolipoprotein B) ELISA Kit 用途 該試劑盒用于體外定量檢測(cè)Human 血清,血漿或其他生物體液中天然及部分重組ApoB濃度
CAL 27細(xì)胞我們的細(xì)胞株來(lái)源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等,購(gòu)買到貨后,由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存,凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過(guò)QC檢測(cè),100%進(jìn)口來(lái)源,100%保證5代以內(nèi),活力>95%,無(wú)**、支原體污染。 細(xì)胞到達(dá)客戶手中,1個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)任何問(wèn)題,導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡,我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次。產(chǎn)品僅用于科學(xué)研究