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產(chǎn)品名稱：球孢白僵菌 斜面

編號(hào)：BH-J011128

拉丁文:Beauveria bassiana (Bals.-Criv.) Vuill.

分離基物: 馬尾松毛蟲幼蟲

提供形式: 斜面培養(yǎng)物

**等級(jí): 1

模式菌株: no

應(yīng)用領(lǐng)域: 鱗翅目害蟲生物防治

培養(yǎng)基: 綜合PDA：馬鈴薯煮汁1000mL，磷酸二氫鉀 3g，硫酸鎂 1.5g，葡萄糖 20g，維生素B1 10mg，瓊脂 20g，pH自然。馬鈴薯煮液：200g馬鈴薯，去皮，切塊，放入蒸餾水中煮沸30min，取濾液定容至1000mL,備用。121℃，15min。

生長(zhǎng)條件: 25℃，好氧

生長(zhǎng)特性: 菌落白色、粉狀、10d直徑32.28mm，菌落薄而平，表面有放射狀溝紋，孢子層略突起，背面無色素。分生孢子為橢圓形、無色、光滑、孢子大多為2-2.5×5－6μm；菌絲粗1.5－2μm；產(chǎn)孢細(xì)胞（瓶梗）濃密簇生于菌絲、分生孢子梗或膨大的泡囊（柄細(xì)胞）上，球形至瓶形，頸部明顯延長(zhǎng)成粗1μm，長(zhǎng)達(dá)20μm的產(chǎn)孢軸，軸上具小齒突，成 “之”字形彎曲。產(chǎn)孢細(xì)胞和泡囊常增生，在分生孢子?；蚓z上大多具成球形的密實(shí)孢子頭，在低倍鏡下即可看到。

存儲(chǔ)條件: 定期移植法

保存方法：

傳代保存法：培養(yǎng)基的濃度不宜過高，營(yíng)養(yǎng)成分不宜過于豐富，尤其是碳水化合物的濃度應(yīng)在可能的范圍內(nèi)盡量降低。培養(yǎng)溫度通常以稍低于適生長(zhǎng)溫度為好。若為產(chǎn)酸菌種，則應(yīng)在培養(yǎng)基中添加少量碳酸鈣 [3] 。

液體石蠟覆蓋保存法：該法較前一種方法保存菌種的時(shí)間更長(zhǎng)，適用于霉菌、酵母菌、放線菌及需氧等的保存。

懸液保存法：

① 蒸餾水保存法：適用于霉菌、酵母菌及絕大部分放線菌，將其菌體懸浮于蒸餾水中即可在室溫下保存數(shù)年。本法應(yīng)注意避免水分的蒸發(fā)。

② 糖液保存法：適用于酵母菌，如將其菌體懸浮于10%的蔗糖溶液中，然后于冷暗處保存，可長(zhǎng)達(dá)10年。除此之外，也可使用緩沖液或食鹽水等進(jìn)行保存。

載體保存法：①土壤保存法；②砂土保存法；③硅膠保存法；④磁珠保存法；⑤麩皮保存法；⑥紙片(濾紙)保存法。

常用的冷凍保存法：

① 低溫冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃)：低溫冷凍保存時(shí)使用螺旋口試管較為方便，也可在棉塞試管外包裹塑料薄膜。保存時(shí)菌液加量不宜過多，有些可添加保護(hù)劑。此外，也可用φ5mm的玻璃珠來吸附菌液，然后把玻璃珠置于塑料容器內(nèi)，再放入低溫冰箱內(nèi)進(jìn)行保存的。

② 干冰保存法(-70℃左右)：即將菌種管插入干冰內(nèi)，再置于冰箱內(nèi)進(jìn)行冷凍保存。

③ 液氮保存法(-196℃)：是適用范圍廣的微生物保存法。        

微生物菌種的培養(yǎng)：

⒈ 孢子制備

⑴ 放線菌孢子的制備

一般采用瓊脂斜面培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中含有一些適合產(chǎn)孢子的營(yíng)養(yǎng)成分，如麩皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些無機(jī)鹽等。碳源和氮源不要太豐富(碳源約為1％，氮源不超過0.5％)，碳源豐富容易造成生理酸性的營(yíng)養(yǎng)環(huán)境，不利于放線菌孢子的形成，氮源豐富則有利于菌絲繁殖而不利于孢子形成。一般情況下，干燥和限制營(yíng)養(yǎng)可直接或間接誘導(dǎo)孢子形成。放線菌斜面的培養(yǎng)溫度大多數(shù)為28 ℃，少數(shù)為37 ℃，培養(yǎng)時(shí)間為5～14天。

⑵ 霉菌孢子的制備

霉菌的孢子培養(yǎng)，一般以大米、小米、玉米、麩皮、麥粒等天然農(nóng)產(chǎn)品為培養(yǎng)基。這是由于這些農(nóng)產(chǎn)品中的營(yíng)養(yǎng)成分較適合霉菌的孢子繁殖，而且這類培養(yǎng)基的表面積較大，可獲得大量的孢子。霉菌的培養(yǎng)一般為25～28 ℃，培養(yǎng)時(shí)間為4～14天。

⒉ 種子制備

⑴ 搖瓶種子制備

搖瓶種子進(jìn)罐，常采用母瓶、子瓶?jī)杉?jí)培養(yǎng)，有時(shí)母瓶種子也可以直接進(jìn)罐。種子培養(yǎng)基要求比較豐富和完全，并易被菌體分解利用，氮源豐富有利于菌絲生長(zhǎng)。原則上各種營(yíng)養(yǎng)成分不宜過濃，子瓶培養(yǎng)基濃度比母瓶略高，更接近種子罐的培養(yǎng)基配方。

⑵ 種子罐種子制備

種子罐種子制備的工藝過程，因菌種不同而異，一般可分為種子、二級(jí)種子和三級(jí)種子的制備。孢子(或搖瓶菌絲)被接入到體積較小的種子罐中，經(jīng)培養(yǎng)后形成大量的菌絲，這樣的種子稱為種子，把種子轉(zhuǎn)入發(fā)酵罐內(nèi)發(fā)酵，稱為二級(jí)發(fā)酵。如果將種子接入體積較大的種子罐內(nèi)，經(jīng)過培養(yǎng)形成更多的菌絲，這樣制備的種子稱為二級(jí)種子，將二級(jí)種子轉(zhuǎn)入發(fā)酵罐內(nèi)發(fā)酵，稱為三級(jí)發(fā)酵。同樣道理，使用三級(jí)種子的發(fā)酵，稱為四級(jí)發(fā)酵。

甲磺酸齊拉西酮（標(biāo)準(zhǔn)品）  Ziprasidone mesilate  質(zhì)量規(guī)格：HPLC法含量測(cè)定 小鼠絨毛膜促性腺β(β-CG)ELISA試劑盒 ，英文名： β-CG ELISA Kit

鹽酸美利曲辛（標(biāo)準(zhǔn)品）  Melitracen   質(zhì)量規(guī)格：含量測(cè)定 小鼠溶菌酶(LZM)ELISA試劑盒 ，英文名： LZM ELISA Kit

咪唑斯?。?biāo)準(zhǔn)品）  Mizolastine  質(zhì)量規(guī)格：HPLC法含量測(cè)定 小鼠溶酶體酸性0酸酶2(ACP2)ELISA試劑盒 ，英文名： ACP2 ELISA Kit

地氯雷他定（標(biāo)準(zhǔn)品）  Desloratadine  質(zhì)量規(guī)格：UV法含量測(cè)定 小鼠溶血0脂酸受體3(LPAR3)ELISA試劑盒 ，英文名： LPAR3 ELISA Kit

糠酸莫米松（標(biāo)準(zhǔn)品）  Mometasone Furoate  質(zhì)量規(guī)格：鑒別 小鼠乳酸脫氫酶(LDH)ELISA試劑盒 ，英文名： LDH ELISA Kit

鹽酸戊乙奎醚（標(biāo)準(zhǔn)品）  Penehyclidine   質(zhì)量規(guī)格：含量測(cè)定 小鼠乳鐵傳遞蛋白/乳鐵蛋白(LF/LTF)ELISA檢測(cè)試劑盒MouseLactoferrin,LTF/LFELISAkit 96T/48T

3-奎寧醇（標(biāo)準(zhǔn)品）  3-quinuclidinol  質(zhì)量規(guī)格：檢查用 小鼠乳鐵傳遞蛋白/乳鐵蛋白(LF/LTF)ELISA試劑盒 ，英文名： LF/LTF ELISA Kit

普伐他汀四甲基丁胺（標(biāo)準(zhǔn)品）  Pravastatin1,1,3,3-tetramethylbutylamine  質(zhì)量規(guī)格：含量測(cè)定 小鼠色素上皮衍生因子(PEDF)ELISA檢測(cè)試劑盒Mousepigmeepithelium-derivedfactor,PEDFELISAKit 96T/48T

鹽酸伊托必利（標(biāo)準(zhǔn)品）  Itopride   質(zhì)量規(guī)格：含量測(cè)定 小鼠色素上皮衍生因子(PEDF)ELISA試劑盒 ，英文名： PEDF ELISA Kit

福辛普利鈉（標(biāo)準(zhǔn)品）  Fosinopril   質(zhì)量規(guī)格：含量測(cè)定 小鼠沙眼衣原體抗體IgG(CT IgG)ELISA試劑盒 ，英文名： CT IgG ELISA Kit

1163719-91-2  CCT241161  1mg  Nipah Virus(NiV)尼帕病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒  動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒  50次  低溫  負(fù)20度

1163719-91-2  CCT241161  500μg  Nipah Virus(NiV)尼帕病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒  動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒  50次  低溫  負(fù)20度

1163719-91-2  CCT241161  5mg  Nairobi Sheep Disease Virus(NSDV)內(nèi)羅畢羊病病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒  動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒  50次  低溫  負(fù)20度

116-38-1  Edrophonium (chloride)  10mM(in1mLDMSO)  Entamoeba histolytica溶組織內(nèi)阿米巴探針法熒光定量PCR試劑盒  動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒  50次  低溫  負(fù)20度

116-38-1  Edrophonium (chloride)  1g  Entamoeba spp. 內(nèi)阿米巴通用探針法熒光定量PCR試劑盒  動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒  50次  低溫  負(fù)20度

丙酯殺螨醇 標(biāo)準(zhǔn)品 gamma-Cyhalothrin  10ng/ul，10ML 特征形態(tài) 液態(tài)

一氯殺螨砜 標(biāo)準(zhǔn)品 Cyanophos  10ng/ul于環(huán)己烷，10ml 特征形態(tài) 液態(tài)

4-氯二苯醚 標(biāo)準(zhǔn)品 Cyanofenphos  10ng/ul于甲醇,10ML 特征形態(tài) 液態(tài)

菌種的培養(yǎng)：

球孢白僵菌 斜面1、是指食用菌菌絲體及其生長(zhǎng)基質(zhì)組成的繁殖材料。菌種分為母種（種）、原種（二級(jí)種）和栽培種（三級(jí)種）三級(jí)。工業(yè)發(fā)酵的有用菌種，其篩選步驟包括菌種分離、初篩和復(fù)篩。

2、挑選具有某種能力的有用菌種，也稱種子制備，是指菌種在一定條件下，經(jīng)過擴(kuò)大培養(yǎng)成為具有一定數(shù)量和質(zhì)量的純生產(chǎn)菌種的制備過程。以作接入發(fā)酵罐中進(jìn)一步擴(kuò)大菌體量及合成產(chǎn)物之用。

3、種子制備包括孢子制備和菌絲體制備 菌種制備。

4、保存在沙土管或冷凍管中的生產(chǎn)菌種，用無菌手續(xù)挑取少許，接入瓊脂斜面培養(yǎng)基上，在25℃（或較高溫度）下培養(yǎng)5～7天（或較長(zhǎng)時(shí)間。所得孢子還需進(jìn)一步用較大表面積的固體培養(yǎng)基以獲得更多孢子（對(duì)于霉菌類孢子制備，多數(shù)采用大米、小米之類的天然培養(yǎng)基）。

5、將培養(yǎng)成熟的斜面孢子制成懸浮液，接種到扁瓶固體培養(yǎng)基上，于25～28℃培養(yǎng)14天。將成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4℃冰箱中備用。一次制得的孢子瓶可在生產(chǎn)上延續(xù)使用半年左右。

6、如果有些生產(chǎn)菌種不產(chǎn)孢子，如赤霉素產(chǎn)生菌或產(chǎn)孢子不多的，則可采用搖瓶液體培養(yǎng)制得菌絲體，作種子罐的種子。種子罐的目的是使接入有限的孢子或菌絲體迅速發(fā)芽、生長(zhǎng)、繁殖成大量菌體。其中的培養(yǎng)基組分應(yīng)是易于被菌體利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米漿），及無機(jī)鹽(如磷酸鹽)等。作為發(fā)酵罐的種子應(yīng)生命力旺盛、染色深、菌絲粗壯，無雜菌及異常菌體。接種量一般在10%～20%。